PCR教学试剂盒 (P8021-P8022)

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PCR教学试剂盒 (P8021-P8022)

价格: 120.00
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P8021(30次 500 bp) P8022( 30次 1,000 bp)

PCR教学试剂盒

Cat. #P8021P8022

产品概况

本试剂盒是按照教学实验内容设计的,符合标准扩增流程的,教学用PCR反应试剂盒。本试剂盒所提供的模板为插入特定大小DNA片段的PBluescipt SK+)重组质粒;引物为根据所插入DNA序列和扩增片段大小不同设计的上下游引物。PCR结果可获得特定大小(500 bp1,000 bp)的PCR产物。

 

产品组成

Component

P8021

500 bp30次)

P8022

1,000 bp30次)

DNA模板

150 μl500 bp

150 μl1,000 bp

上游引物 (10 μM)

75 μl

75 μl

下游引物(10 μM)

75 μl

75 μl

dNTP混合物(2.5 mM)

150 μl

150 μl

Taq DNA聚合酶(2.5 U/μl)

40 μl

40 μl

10×PCR缓冲液

500 μl

500 μl

超纯水

1 ml

1 ml

说明书

1

1

 

活性定义

一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃30 min内,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

 

保存条件

10×PCR缓冲液保存于4℃,其他成分-20℃保存。

 

质量控制

纯度检测:经质量检测,产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能检测:PCR方法检测本试剂盒无宿主残余DNA,也无其他DNA污染,能有效完成PCR扩增。

 

应用举例

1. 配制反应体系

请于冰上配置反应体系,体系大小与组分用量与添加顺序可调整:

Ordinal

Component

Volume

(25 μl reaction volume)

Volume

(50 μl reaction volume)

Volume

(50 μl reaction volumen)

1

10×PCR缓冲液(Mg2+ Plus

2.5 μl

5 μl

5×(n+1) μl

2

dNTPs2.5mM

2 μl

4 μl

4×(n+1) μl

3

上游引物   (10 μM)

1 μl

2 μl

2×(n+1) μla μl×(n+1)

4

下游引物   (10 μM)

1 μl

2 μl

2×(n+1) μla μl×(n+1)

5

Taq   DNA聚合酶(2.5U/μl

0.5 μl

1 μl

1×(n+1) μla μl×(n+1)

6

template   DNA

2 μl

4 μl

4×(n+1) μla μl×(n+1)

7

超纯水

16 μl

32 μl

32×(n+1) μl

8

石蜡油

如不能设置顶盖温度,需适量加入石蜡油。

 加入各组分后,请用枪头反复吸吹几次,充分混匀。

 在一次配制多管需分装时建议按(n+1)的反应液量配制,以确保分配时的耗损不会影响实验,同时选择大于总体积的离心管便于混匀。

 如需使用其他体积的PCR反应体系,请按各组分比例缩减或增加各组分用量。

 组分中引物、DNA模板、Taq DNA聚合酶常用于梯度实验,如有调整,请注意调超纯水的用量至相应的体系。

 将混匀的各管短暂离心,置于PCR仪中。

 

2. 设定反应程序进行PCR反应

Stage  

Temperature

Time

Number   of Cycles

Initial   Denaturation

94

3   min

1

Denaturation

94

30   sec

30

Annealing

55

30   sec

Extension

72

30   sec or 45 sec

Final   Extension

72

5   min

1

 设定PCR程序时,请根据目的片段大小决定延伸时间,如果目的片段大小为500 bp时,延伸时间为30 sec,目的片段为1 kb时,延伸时间为45 sec

 

3. 分析结果

反应结束后取2-5 μl反应产物与loading buffer混匀后进行琼脂糖凝胶电泳,通过凝胶成像设备观察目的条带的扩增情况。

 500 bp产物建议电泳条件为1.7%琼脂糖凝胶,0.5×TBE7 V/cm20-40 min,建议Marker DSTM 2000M1101)。

 1 kb产物建议电泳条件为1.0%琼脂糖凝胶,1×TAE7 V/cm20-40 min,建议Marker DSTM 5000M1111)。

 

注意事项

请严格按照说明书提供的实验体系及实验条件进行试验。

室温下Taq DNA聚合酶有一定的活性,为避免发生非特异性扩增,请于冰上配置反应体系,并且最后添加Taq DNA聚合酶或模板DNA

挑取菌落时,应选择单菌落,不要挑取太多菌体,以免影响PCR结果。


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