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RT-PCR Mix for qPCR(预混型逆转录试剂盒)R1031

一步法逆转录-荧光定量快速检测试剂盒高品质原料
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R1031 /100次(20 ?l反应体系)

RT-PCR Mix for qPCR预混型逆转录试剂盒)

货号:R1031   规格:100次(20 ?l反应体系)

 

产品说明

RT-PCR Mix for qPCR是预混型逆转录反应试剂盒,操作简便,可快速高效完成逆转录反应。其中Enzyme Mix含有高效逆转录酶和热敏型DNase,一步完成基因组DNA的清除以及RNA的逆转录反应,RT Buffer包含逆转录反应所需的其他组分,无需分步多次加样,降低了样品污染的风险。同时,本试剂盒配备了Control Mix,用于阴性对照反应,检验RNA模板中是否有基因组DNA残留。本试剂盒的逆转录产物对染料法和探针法荧光定量PCR反应均有很好的兼容性,可进行精准的基因表达分析

 

产品组分

组分

R1031100

Enzyme Mix

100 μl

5X RT Buffer

400 μl

Control Mix

20 μl

RNase-free ddH2O

1 ml × 2

 

保存条件

各组分均-20℃保存,并避免反复冻融。

 

适用范围

第一链cDNA 合成

 

注意事项

本品含有热敏型DNase,请于冰上使用本品各组分。

为保证成分均匀,请将Enzyme Mix5X RT BufferControl Mix分别瞬时离心、吹打混匀后再汲取使用。

在操作过程中,注意防止引入RNase导致RNA降解RNA最好保存于-70℃,避免反复冻融。

cDNA产物应置于-20℃或以下保存避免反复冻融

 

操作步骤

1. 配制反应体系

按以下体系,在冰浴的无菌无酶离心管中配制反应混合液:

组分

用量

5X RT Buffer

4 μl

Enzyme Mix

1 μl

RNA

1pg-1?g

RNase-free ddH2O

补足至20 μl 

 

阴性对照反应(可选)

即不加逆转录酶的反应,产物用于在qPCR中作为阴性对照,检验模板RNA中是否有基因组DNA残留

按以下体系,在冰浴的无菌无酶离心管中配制反应混合液:

组分

用量

5X RT Buffer  

4 μl

Control Mix

1 μl

RNA

1pg-1?g

RNase-free ddH2O

补足至20 μl 

 

2. 进行逆转录反应

将上述混合液吹打混匀,瞬时离心收集至管底。按以下程序,在PCR仪中进行反应:

温度

时间

50

15 min

85

5 sec

 

3. qPCR反应及cDNA保存

cDNA产物可稀释后马上进行染料法或探针法qPCR反应。若使用未稀释的cDNA原液,则体积不能超过反应体系的1/10,以避免抑制反应效率。长期保存cDNA产物应于-20℃或以下环境中并避免反复冻融

 


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