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Taq DNA聚合酶(P1011-P1012-P1013-P1014-P1015)

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Taq DNA聚合酶(P1011-P1012-P1013-P1014-P1015)

Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来源的热稳定重组型Taq DNA聚合酶，分子量为94 KD。扩增片段的长度可达10 kb（简单模板）。延伸速度为1min/kb（70~75℃，简单模板可达10s/kb）。该酶具有5→3聚合酶活性，无3→5外切酶活性。扩增产物具有3-dA，可直接用于TA克隆。
促销： ￥90.00~1330.00
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P1011(500U) P1012*(500U) P1013(1000U) P1014*(1,000U) P1015(1,2000U)
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Taq DNA聚合酶

Cat. #：P1011，P1012，P1013，P1014，P1015

产品概况

Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来源的热稳定重组型Taq DNA聚合酶，分子量为94 KD。扩增片段的长度可达10 kb（简单模板）。延伸速度为1min/kb（70~75℃，简单模板可达10s/kb）。该酶具有5'→3'聚合酶活性，无3'→5'外切酶活性。扩增产物具有3'-dA，可直接用于TA克隆。

产品组成

Component

P1011

500U

P1012

500U

P1013

1,000U

P1014

1,000U

P1015

12,000U

Taq DNA聚合酶（5U/μl）[1]

100 μl

100 μl

200 μl

200 μl

100 μl × 24

Taq DNA聚合酶（2.5U/μl）[1]

200 μl

200 μl

400 μl

400 μl

200 μl × 24

10× Taq Buffer（Mg2+ Plus）[2]

1.25 ml

1.25 ml

1.25 ml × 2

1.25 ml × 2

1.25 ml × 24

10× Tpol Buffer（Mg2+ Plus）[2]

1.25 ml

1.25 ml

1.25 ml × 2

1.25 ml × 2

1.25 ml × 24

6× Loading Buffer[3]

1 ml

1 ml

1 ml

1 ml

-

dNTPs（2.5mM）[4]

-

1 ml

-

1 ml × 2

-

[1] 提供5U/μl和2.5U/μl两种活性单位的包装可供选择，如无特别说明默认5U/μl。

[2] 10× Taq Buffer和10× Tpol Buffer 分为Mg2+ Plus与Mg2+ Free两种包装可供选择，如无特别说明默认Mg2+ Plus。Mg2+ Free的10× Taq Buffer提供25mM MgCl2，Mg2+ Free的10× Tpol Buffer提供25mM MgSO4。Taq Buffer能满足大多数常规PCR反应，优先使用此Buffer。Tpol Buffer对于提高PCR特异性有显著作用。

[3] P1015不含6× Loading Buffer，如有需要请单独购买（Cat. #：M9041）。

[4] dNTPs是dATP、dGTP、dCTP和dTTP等摩尔混合物，P1011/P1013/P1015不含dNTPs，如有需要请单独购买（Cat. #： P9011/P9012/P9013）。

活性定义

一个活性单位（U）指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃、30 min内，摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

保存条件

-20℃保存2年。

质量控制

纯度检测：经质量检测，产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。

功能检测：PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。

应用举例

1. 配制反应体系

请于冰上配置反应体系，体系大小与组分用量与添加顺序可调整：

Ordinal

Component

Volume

(50 μl reaction volume)

Final   concentration

(50 μl reaction volume)

1

10× Taq Buffer（Mg2+ Plus）[1]

5 μl

1×

2

dNTPs（2.5mM）

4 μl

0.4 mM

3

upstream primer (10 μM)[2]

2 μl

0.4 μM

4

downstream primer (10 μM)[2]

2 μl

0.4 μM

5

Taq DNA聚合酶（5U/μl）[3]

0.5 μl

2.5U

6

template DNA[4]

1-4 μl

<1μg

7

超纯水[5]

To 50 μl

-

optional

MgCl2(MgSO4)/PCR Enhancer[6]

Variable

-

[1] Taq Buffer能满足大多数常规PCR反应，优先使用此Buffer。若要提高特异性可使用Tpol Buffer。

[2] 引物终浓度建议范围：0.1-1 μM。特异性差时可降低浓度，效率低时可提高浓度。

[3] 根据目的片段扩增的难易程度调整DNA聚合酶的用量。

[4] 不同模板最佳用量不同，部分DNA模板建议用量如下表（50 μl反应体系）。

Template

Dosage

人类基因组DNA

0.1μg-1μg

λDNA

0.5ng-5ng

大肠杆菌基因组DNA

10ng-100ng

质粒DNA

0.1ng-10ng

[5] 可单独订购超纯水（Cat. #：P9021/P9022/P9023）。

[6] 可单独订购25mM MgCl2（Cat. #：P9031）和PCR Enhancer（Cat. #：P9041）。

2. 设定反应程序进行PCR反应

Stage

Temperature

Time

Number of Cycles

Initial Denaturation

94℃

3 min

1

Denaturation

94℃

30 sec

25-35

Annealing

55-68℃[1]

30 sec

Extension

72℃

Variable[2]

Final Extension

72℃

5-10 min

1

[1] 退火温度应根据Tm值较低的引物来设。

[2] 延伸时间按1min/kb来设最佳（简单模板可达10s/kb）。

3. 分析结果

将产物与loading buffer混匀后进行琼脂糖凝胶电泳，通过凝胶成像设备观察目的条带的扩增情况。如有需要，可进行割胶回收。

无产物或产物量少的改进措施有：1调整退火温度；2减少抑制剂的影响，如提取的基因组DNA中含有抑制扩增的成分，需要高倍稀释（1: 10000）后使用；3采用乙醇沉降洗脱，提高模板DNA的纯度；4使用PCR添加剂，如PCR Enhancer（Cat. #：P9041）、MgCl2（Cat. #：P9031）等可提高产量。

操作注意事项

1 室温下Taq DNA聚合酶有一定的活性，为避免发生非特异性扩增，请于冰上配置反应体系，并且最后添加Taq DNA聚合酶或模板DNA。

2 Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性，因此在PCR产物3'末端通常会加上1个多余的脱氧腺嘌呤核苷，可直接用于TA克隆。也可以使用Taq DNA聚合酶进行加A反应。

3 碱基错误率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。Taq DNA聚合酶的碱基错误率为1×10-5。

引物设计注意事项

引物长度一般在15-30个碱基之间；上下游引物3’末端避免互补，避免出现3个以上重复的G或C，或出现发夹结构，否则会产生非特异性扩增；GC含量控制在40-60%，且上下游引物GC含量尽量接近；Tm值控制在55-65℃之间，且上下游引物Tm值尽量接近，额外附加序列（酶切位点、修饰等）是非模板匹配序列，不参与Tm值计算。

相关产品

名称

货号

规格

PCR Mix

P2011/P2012/P2013/P2014/P2015

1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

Power Green qPCR Mix

P2101/P2102/P2103/P2104/P2105

1ml/5ml/10ml/50ml/100ml

1kb ladder

M1181/M1182

50次/250次

DSTM5000

M1111/M1112

60次/300次

高纯度质粒小提试剂盒

N1011/N1012/N1013

50次/100次/200次

通用RNA提取试剂盒

R1051

50次

基因组DNA快速提取试剂盒

N1111/N1112

50次/100次

DNA凝胶回收试剂盒

N1071/N1072/N1073

50次/100次/200次

RT-PCR Kit

R1011/R1012

20次/100次

更多PCR酶、DNA Marker及核酸提纯类产品请登录东盛生物官网查询。

 


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